FISH（熒光原位雜交）

熒光原位雜交用于通過互補(bǔ)探針序列的雜交來顯示確定的核酸序列。FISH 有很多應(yīng)用，從基本的基因定位到染色體畸變的診斷（細(xì)胞遺傳學(xué)）。多色 FISH 圖像分析需要使用單獨(dú)的濾光片激發(fā)塊（立方體）或激發(fā)濾光片轉(zhuǎn)輪結(jié)合多波段二向色鏡和發(fā)射濾光片來隔離各種信號(hào)。

熒光免疫原位雜交（FISH）和 多路復(fù)用（Densely Multiplexed）成像的串色

當(dāng)同時(shí)使用具有多個(gè)密集光譜的熒光染料時(shí)，區(qū)分熒光標(biāo)記的能力決定了檢測(cè)結(jié)果的速度和準(zhǔn)確性。在進(jìn)行熒光免疫原位雜交 （FISH）測(cè)量時(shí)，這種密集的圖像復(fù)用特別重要。因此，減少串色（即來自不希望的熒光染料的信號(hào)相對(duì)于所需熒光染料的信號(hào)影 響）至關(guān)重要。下表量化了使用特定的
BrightLine 熒光免疫原位雜交（FISH）濾光片組時(shí)，相鄰熒光染料之間的串?dāng)_值。該串?dāng)_值 決定于典型的歸一化熒光染料光譜、濾光片的設(shè)計(jì)光譜和強(qiáng)金屬鹵化物燈光譜的重疊。

這些結(jié)果已經(jīng)針對(duì)每個(gè)給定的濾光片組進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化，因此用戶應(yīng)該讀取每行（而不是每列）的值以查看給定濾光片組的預(yù)期串?dāng)_值。

例如，當(dāng)使用 SpectrumGold™ 濾光片組對(duì)標(biāo)記有 SpectrumGreen™、SpectrumGold™ 和 SpectrumRed™ 熒光染料的樣品進(jìn)行 成像時(shí)，不需要的 SpectrumGreen 信號(hào)將小于所需要的 SpectrumGold 信號(hào)的 2%，并且 SpectrumRed 信號(hào)將小于1%。

好的濾光片會(huì)帶來哪些不同 ?

BrightLine“不易燒熔”濾光片在多年的使用中，在研究和臨床領(lǐng)域都得到了廣泛的測(cè)試。BrightLine 熒光免疫原位雜交 FISH 濾光片組也進(jìn)行了嚴(yán)格的獨(dú)立測(cè)試。結(jié)果顯示：使用 BrightLine 濾光片組進(jìn)行熒光免疫原位雜交 FISH 分析時(shí)，無論您是查找 和分析中期分裂，還是通過點(diǎn)計(jì)數(shù)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行評(píng)分，都可以提高分析的速度和準(zhǔn)確性。

熒光濾光片簡介

一個(gè)分子吸收其吸收譜帶波長范圍（即吸收光譜）內(nèi)的光，然后幾乎瞬間發(fā)出較長的、位于其發(fā)射譜帶波長范圍（即發(fā)射光譜）內(nèi)的光，此時(shí)，就會(huì)發(fā)生光學(xué)熒光。為了達(dá)到分析的目的，強(qiáng)的熒光分子，亦被稱為熒光團(tuán)、熒光染料，專門用于連接到生物分子或其他感興趣的目標(biāo)，用于鑒定、定量、甚至實(shí)時(shí)觀察物質(zhì)的生物和化學(xué)活性。熒光染料因?yàn)榫哂?的靈敏度、高特異性和簡單性，被廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)和分析檢測(cè)中。大多數(shù)熒光儀器，包括熒光顯微鏡，都是基于光學(xué)濾光片。

一個(gè)典型的系統(tǒng)有三個(gè)基本的濾光片組成：激發(fā)濾光片（或吸收濾光片），二向色鏡分束鏡（或二向分色鏡）和發(fā)射濾光片（或阻擋濾光片）。激發(fā)濾光片通常是一個(gè)帶通濾光片，它只透過熒光染料的吸收波長，從而最大限度地減少熒光的其他來源的激發(fā)光和阻擋熒光發(fā)射帶內(nèi)的激發(fā)光。二向色鏡分束鏡是一種邊緣濾光片，用于斜角入射 （通常是 45 °），以有效地反射激發(fā)波段的光和透射發(fā)射波段的光。Semrock 發(fā)射濾光片通常是一個(gè)帶通濾光片，僅透過熒光染料的發(fā)射波長，并阻擋這個(gè)波段之外的所有不需要的光 - 尤其是激發(fā)光。通過濾光片阻擋不需要的激發(fā)能量（包括紫外和紅外）或樣品和系統(tǒng)的自發(fā)熒光，就可以得到具有黑暗背景的熒光圖像。

我們可以通過選擇適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)濾光片，組成一個(gè)濾光片組，用于觀察熒光或者對(duì)熒光進(jìn)行成像，這樣就可以達(dá)到使一個(gè)給定的熒光染料可視化的目的。因?yàn)椴煌瑹晒馊玖系募ぐl(fā)光譜和發(fā)射光譜不同，濾光片組需要優(yōu)化，才可以用于不同熒光染料的同時(shí)成像。在不同的實(shí)驗(yàn)條件下使用同一個(gè)熒光染料時(shí)，濾光片組也需要優(yōu)化。